1.4标本dna的提取及pcr扩增提取摸板dna,pcr循环参数首先95℃变性5min,然后94℃变性30s,退火55℃30s,延伸72℃40s,扩增30个循环,最后72℃延伸5min。扩增产物在2%琼脂糖凝胶(含0.5mg。l-1溴化乙锭)上电泳,在暗箱式紫外检测分析仪内观测,通过凝胶成像仪储存于电脑中。
2结果
共检测34例ssss患者标本,采用pcr方法检测ssss原发皮损中的eta、etb、eta和etb阳性结果分别为21例(61.76%)、7例(20.58%)和4例(11.76)。应用elisa方法检测标本培养分离菌株eta、etb、eta和etb阳性结果分别为10例(29.41%)、4例(11.76%)和1例(2.94%)。经统计学处理差异有显著性(p<。0.01),pcr较elisa方法敏感。
采用pcr方法检测37例脓疱疮患者原发皮损,阳性结果eta19例(51.35%)、etb8例(21.62%)、eta和etb1例(2.7%)。说明脓疱疮和ssss关系密切,表皮剥脱毒素是ssss的发病机理之一。非金黄色葡萄球菌型中毒性表皮坏死松解症患者的标本表皮松解毒素均为阴性。